Aplicaciones diagnósticas del estudio por PCR de los reordenamientos de los receptores T y de las inmunoglobulinas en oncohematología / Diagnostic applications of PCR studies of T cell receptor and immunoglobulin gene rearrangements in oncohematology

El trabajo consiste en la puesta a punto de diversas técnicas de biología molecular para el diagnóstico de leucemias y linfomas dentro del Instituto. Por medio de la técnica de PCR, utilizada para detectar reordenamientos de los genes de la cadena pesada de las inmunoglobulinas y en el receptor de los linfocitos T (cadena µ), se determina clonalidad en las LLA y algunos linfomas en los cuales los métodos convencionales ofrecen dificultad diagnóstica. Se han analizado 64 muestras de ADN provenientes de pacientes de la Sección Inmunología Oncológica del Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex" (I.I.HEMA.), 19 biopsias de linfomas incluidas en parafina y 14 cultivos celulares de pacientes del mismo Instituto. Se ha detectado clonalidad B por PCR mediante la identificación de un fragmento de alrededor de 100 bp en una serie de pacientes oncohematológicos. En 81 ensayos se ha detectado reordenamiento VDJ en 52 casos, distribuidos de la siguiente manera: 15/19 biopsias de linfomas incluidas en parafina, 13/14 cultivos de células mononucleares periféricas de pacientes hemofílicos HIV+ y 24/48 pacientes con leucemias y linfomas (material fresco). Se han detectado reordenamientos en las cadenas µ del receptor T por PCR Multiplex con la idea de complementar el diagnóstico en la identificación de la clonalidad T. Se detectaron reordenamientos en el locus TCGR en 23 de las 30 muestras de ADN provenientes de células mononucleares totales de pacientes con linfomas y leucemias. Este es el primer paso para la realización de un diagnóstico preciso y a partir de aquí poder detectar la enfermedad mínima residual en los pacientes post-tratamiento.

In acute lymphoblastic leukemia deletion of the tumor suppressor gene P16 is associated with abnormal interferon genes

The putative tumor-suppressor gene p16 was mapped to human chromosome 9p21, close to the interferon alpha cluster. The frequency and association of gene alterations of p16, interferon alpha and interferon beta were investigated in a total of 39 Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) patients. Of these, 10 patients (25.6 per cent) presented abnormalities of at least one of the three genes studied. In 32 ALL cases studies of the three genes could be accomplished. In 23 out of 32 ALL cases the 3 genes studied were normally preserved. In the remaining 9 ALL, p16 was affected in 8 cases by homozygous deletions. In 2 patients, p16 deletion was associated with homozygous deletions for interferon alpha and interferon beta genes and in 1 case with total deletion of interferon beta 1 gene and partial deletion of interferon alpha. In the remaining 5 cases, p16 was the only gene deleted with no alteration of type interferon genes. These data indicate that p16 gene is deleted in a higher frequency than type I interferon genes in ALL. Moreover, within the ALL group with p16 gene deletion, 37.5 per cent are associated with interferon deletions and in general, ALL with alpha and/or beta interferon gene deletions are associated with p16 deletions. Therefore, p16 gene deletion with preserved type I interferon genes in some ALL suggests that the absence of this cdk inhibitor may disturb the normal cell cycle and favor blast transformation.